2.溶解

加熱(rè)溶解，特别是(shì)加有(yǒu)瓊脂的(de)培養基，一(yī)定要(y₩♣☆ào)煮沸，瓊脂的(de)熔解溫度95～97℃ ，且需要(yào)邊

4.過濾

三角瓶，否則滅菌時(shí)培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作(zα∏∑uò)搖瓶培養，則15～20 ml培養基/250

液體(tǐ)培養基一(yī)般裝4～5 ml，€ε≠約試管的(de)1/4高(gāo)度；

固體(tǐ)斜面培養基一(yī)般裝3～4 ml，約試管的(de)1/5₹®高(gāo)度。

6.包紮

7.滅菌

按配方上(shàng)要(yào)求的(de)溫度、壓力進行(xíng)高(gāo)壓蒸汽滅菌。如↕ ↓(rú)果滅菌的(de)溫度太高(gāo)，營養成分(fēn)會(hε≤uì)被破壞，培養

基中的(de)糖、氨基酸會(huì)使培養基的(de)顔​≥∞≤色變深。

滅菌後需要(yào)擺斜面的(de)試管要(yào)趁熱(rè)斜著(zhe)擺放(fàng)，使•$其凝固成為(wèi)一(yī)個(gè)斜面，約占試管長(cháng)度的(de)1/2。

培養基在30℃下(xià)放(fàng)置一(yī)天，無↓↔☆污染的(de)即可(kě)使用(yòng)。一(yī)般用(yεγδòng)牛皮紙(zhǐ)包裹好(hǎo)存放(fàng)于2-8℃冰箱中備用(y'‍≈'òng)

1、選擇适宜的(de)營養物(wù)質
　　總體(tǐ)而言，所有(yǒu)微(wēi)生(shēng)物(wù)生(​≠¶©shēng)長(cháng)繁殖均需要(yào)培養基含有(yǒu)碳  源、氮源、無機(jī)鹽、生(shēng)長(cháng)因子(zǐ)、水(s¶✘§huǐ)及能(néng)源，但(dàn)由于微(wēi)生(shēng)物(wù)營養類φ¶‍型複雜(zá)，不(bù)同微(wēi)生(shēng)物(wù)對(≈Ωduì)營養物(wù)質的(de)需求是(shì)不(bù)一(yī)樣的(de)σ₽★，因此首先要(yào)根據不(bù)同微(wēi)生(sβ£'hēng)物(wù)的(de)營養需求配制(zhì)針對(duì)性強的(de)₹ ε‍培養基。自(zì)養型微(wēi)生(shēng)物(wù)能(néng)從(cóng)簡單≤∞&‌的(de)無機(jī)物(wù)合成自(zì)身(shēn)需要(yào)的(de)糖類、脂類¥​£、蛋白(bái)質、核酸、維生(shēng)素等複雜(zá)的(de)有(yǒu)機(‍♠→jī)物(wù)，因此培養自(zì)養型微(wēi)生εβ‍(shēng)物(wù)的(de)培養基完全♣↑可(kě)以(或應該)由簡單的(de)無機(jī)物(wù)組成。例如(rú)，培養化(huà© )能(néng)自(zì)養型的(de)氧化(huà)硫硫杆菌₹'✔(Thiobacillus thiooxdans)的(de)培≥♠Ω₽養基組成見(jiàn)表3.9。在該培養基配制(zhì)過程中并末專門(mén)加入★π‌其他(tā)碳源物(wù)質，而是(shì)"≥依靠空(kōng)氣中和(hé)溶于水(shuǐ)中的(de)CO2為(wèi)氧化(huà)硫硫>♦π杆菌提供碳源。
　　就(jiù)微(wēi)生(shēng)物(wù)主要(yào)類型©©σ•而言，有(yǒu)細菌、放(fàng)線菌、酵母菌、黴菌、原生(shēng)動物(wù)、藻類及病♥↕∞✘毒之分(fēn)，培養它們所需的(de)培養基各‌∞不(bù)相(xiàng)同。在實驗室中常用(yòng)牛肉Ω<膏蛋白(bái)胨培養基(或簡稱普通(tōng)肉湯培養基)培養細菌σ↑，用(yòng)高(gāo)氏I号合成培養基培§Ω×♣養放(fàng)線菌，培養酵母菌一(yī)← ♥<般用(yòng)麥芽汁培養基，培養黴菌則一(yī)般用(yòng)查氏合成培養基。
　　2、營養物(wù)質濃度及配比合适
　　培養基中營養物(wù)質濃度合适時(shí)微(wēi)生(shēng)物('σwù)才能(néng)生(shēng)長(cháng)良好(hǎo)，營養物(wù)質濃度過低δ (dī)時(shí)不(bù)能(néng)滿足微(wēi)生(shēng)物(wù)正常生(sh ±'σēng)長(cháng)所需，濃度過高(gāo)'≠©÷時(shí)則可(kě)能(néng)對(duì)微(wēi)生(shēng)物(wù)生(shē<™₹<ng)長(cháng)起抑制(zhì)作(zuò)用(yòng)，例如(rú)‍☆®​高(gāo)濃度糖類物(wù)質、無機(jī)鹽、重金(jīn)屬離(lí)子(zǐ)≤→等不(bù)僅不(bù)能(néng)維持和(hé)促進微(wēi)生(shēng)物(wù)的™β✔☆(de)生(shēng)長(cháng)，反而起到(dào)抑菌或殺菌作(zuò)用(yòng)←&。另外(wài)，培養基中各營養物(wù)質之間(jiān)的(de)濃度配比也(yě)直接影(yǐng)響¶≠☆‌微(wēi)生(shēng)物(wù)的(de)生(shēn ♣±★g)長(cháng)繁殖和(hé)(或)代謝(xiè)産物(wù)的★'(de)形成和(hé)積累，其中碳氮比(C/N)的(de)影(yǐng)響較大(dà)。嚴↑"$≤格地(dì)講，碳氮比指培養基中碳元素與氮元素的(de)物(wù)質的(de)量比值，有£₹∏(yǒu)時(shí)也(yě)指培養基中Ω≤£§還(hái)原糖與粗蛋白(bái)之比。例如(rú)，在利用(y÷δ→¥òng)微(wēi)生(shēng)物(wù)發酵生(shēng)産α₽♦谷氨酸的(de)過程中，培養基碳氮比為(wèi)4/l π時(shí)，菌體(tǐ)大(dà)量繁$↑₹π殖，谷氨酸積累少(shǎo)；當培養基碳氮比為(wèi)3/l時(shí)，菌體(tǐ)繁殖受♦ε到(dào)抑制(zhì)，谷氨酸産量則大(dβ$✘à)量增加。再如(rú)，在抗
　　生(shēng)素發酵生(shēng)産過程中，可(kě)以δ"通(tōng)過控制(zhì)培養基中速效氮(或$ ↑碳)源與遲效氮(或碳)源之間(jiān)的(de→®φ)比例來(lái)控制(zhì)菌體(tǐ)生(¶εshēng)長(cháng)與抗生(sh≥✘ēng)素的(de)合成協調。
　　3、控制(zhì)pH條件(jiàn)
　　培養基的(de)pH必須控制(zhì)在一(yī)定的(de)範圍÷♦≠π內(nèi)，以滿足不(bù)同類型微(wēi)生(shēng)物(wù)的(de)π"∞生(shēng)長(cháng)繁殖或産生(shē•↔∏ng)代謝(xiè)産物(wù)。各類微(wēi)生(shēng)物(wù& )生(shēng)長(cháng)繁殖或産生(shēng)代謝©¶(xiè)産物(wù)的(de)最适pH條件(jiàn)各不(bù)相(xi₹♣‌Ωàng)同，一(yī)般來(lái)講，細菌與放(fàng)線菌适于在pH7～7.5範圍'₽∞內(nèi)生(shēng)長(cháng)，酵母菌和(hé)黴€δσ₩菌通(tōng)常在pH4.5～6範圍內(n"‍♥↕èi)生(shēng)長(cháng)。值得(de)注意的(de)是(shì)，在微(wēi)生(×÷shēng)物(wù)生(shēng)長(cháng)繁殖和(héδ♠ →)代謝(xiè)過程中，由于營養物(wù)質被分(fēn)≤₽π解利用(yòng)和(hé)代謝(xiè) &©>産物(wù)的(de)形成與積累，會(huì)導緻培養基pH發生(shēng→ )變化(huà)，若不(bù)對(duì)培養基pH條件(φ$jiàn)進行(xíng)控制(zhì)，往往導緻微(wēi)生(s✔↓hēng)物(wù)生(shēng)長(cháng)速度φΩ₹下(xià)降或(和(hé))代謝(xiè)産物(wù)産量$÷$π下(xià)降。因此，為(wèi)了(le)維持培養基pH的(de)相(xià ₽∏>ng)對(duì)恒定，通(tōng)常在培養基中加入pH緩沖劑，常用(yòng)的(de​✔↑¥)緩沖劑是(shì)一(yī)氫和(hé)二氫磷酸鹽(如(rú)KH2PO4 和(hé)K2 ¶α☆HPO4)組成的(de)混合物(wù)。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4∏×β 溶液呈酸性，兩種物(wù)質的(de)等 ∏✔¥量混合溶液的(de)pH為(wèi)6.8。當培養基中酸性物(wù)質積累導緻H+濃度$±♣增加時(shí)，H+與弱堿性鹽結合形成弱酸性化(huàε )合物(wù)，培養基pH不(bù)會(huì)過度降低 ←ε(dī)；如(rú)果培養基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結合形成弱堿性♥&化(huà)合物(wù)，培養基pH也(yě)不♥₩(bù)會(huì)過度升高(gāo)。
　　但(dàn)KH2PO4 和(hé)K2HPO4緩沖系統隻能(néng  )在一(yī)定的(de)pH範圍(pH↑Ω​6.4～7.2)內(nèi)起調節作(zuò)用(yòng)。有(yǒu)些(xiē)微(wēi©'>×)生(shēng)物(wù)，如(rú)乳酸菌能(néng)大(dà)量産酸，上(shàng©☆↔¥)述緩沖系統就(jiù)難以起到(dào)緩φ♠∏沖作(zuò)用(yòng)，此時(shí)可(kě)在培養基中添加難溶的(de)碳酸鹽(如(r•±↔£ú)CaCO3)來(lái)進行(xíng)調節，CaCO3難γ ε>溶于水(shuǐ)，不(bù)會(huì)→±₹使培養基pH過度升高(gāo)，但(dàn)它可(kě)↕∑&≥以不(bù)斷中和(hé)微(wēi)生(shē®>ng)物(wù)産生(shēng)的(de)酸，同時(shí)釋放(fàng)出C÷✔£O2，将培養基pH控制(zhì)在一(yī)定範圍內(n×↓↔èi)。
　　在培養基中還(hái)存在一(yī)些(xiē)天然α¥‌的(de)緩沖系統，如(rú)氨基酸、肽、蛋白(bái★>)質都(dōu)屬于兩性電(diàn)解質，也(yě)可(kě)起到(d☆βào)緩沖劑的(de)作(zuò)用(yòn​&g)。
　　4、控制(zhì)氧化(huà)還(hái)原電(diàn)位 ∑(redox　potential)
　　不(bù)同類型微(wēi)生(shēng)物(wù)生(shēng)長(c‍€háng)對(duì)氧化(huà)還(hái)原電(diàn)→☆♥δ位(F)的(de)要(yào)求不(bù)一(yī)樣，一(yī)般好(®♦hǎo)氧性微(wēi)生(shēng)物(wù)在F‍>$'值為(wèi)+0.1V以上(shàng)時(shí)可(kě)正常∑δλ生(shēng)長(cháng)，一(yī)般以+±≈0.3一(yī)+0.4V為(wèi)宜，厭(yà←α n)氧性微(wēi)生(shēng)物(<☆wù)隻能(néng)在F值低(dī)于+0.1V條件(jiàn)下(xià)生₽↑(shēng)長(cháng)，兼性厭(yà¶'n)氧微(wēi)生(shēng)物(wùε )在F值為(wèi)+0.1V以上(shàng)時☆≠φ&(shí)進行(xíng)好(hǎo)氧呼吸，在+0.1V以下(xià)時(sh≥ αí)進行(xíng)發酵。F值與氧分(fēn)壓和λ®♠(hé)pH有(yǒu)關，也(yě)受某些(xiē)微♥™α£(wēi)生(shēng)物(wù)代謝(xiè)産物(wù↓Ω)的(de)影(yǐng)響。在pH相(xiàng)對(duì)穩定的(d∏α§e)條件(jiàn)下(xià)，可(kě)通(tōng)過增加通(tōng)氣量(如‍&↓(rú)振蕩培養、攪拌)提高(gāo)培養基的(de)氧分(fēn)壓，或加入氧₽&化(huà)劑，從(cóng)而增加F值；在培養基中加入抗壞血酸₹≠±、硫化(huà)氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等‌"還(hái)原性物(wù)質可(kě)降低(dī)F•‌↑≤值。
　　5、原料來(lái)源的(de)選擇
　　在配制(zhì)培養基時(shí)應盡量利用(yòng)廉價且易于獲得(de)的♥±​♠(de)原料作(zuò)為(wèi)培養基成分(fēn)，特别是(shì)在發酵工(gōn♠≥g)業(yè)中，培養基用(yòng)量很(hě÷​"÷n)大(dà)，利用(yòng)低(dī)成本的(de)原料更體(tǐ)現(xiàn)出其經濟價 ♥✔β值。例如(rú)，在微(wēi)生(shēng)物(wù)單細胞‌¥£蛋白(bái)的(de)工(gōng)業(yè)生(shēng)産過程中，常常利用(yòng)≠<δ 糖蜜(制(zhì)糖工(gōng)業(y₩±∏¶è)中含有(yǒu)蔗糖的(de)廢液)、乳清(乳制(zhì)品工(gō₩≈αng)業(yè)中含有(yǒu)乳糖的(de∏♣β)廢液)、豆制(zhì)品工(gōng)業(yè)廢液及黑(hēi)廢液(造紙(z♠$Ωhǐ)工(gōng)業(yè)中含有(yǒu)戊糖和(hé)己糖的(de)亞硫酸紙(₩¥zhǐ)漿)等都(dōu)可(kě)作(zuò)∑☆®×為(wèi)培養基的(de)原料。再如(rú)，工(gōng)業(yè∏×€)上(shàng)的(de)甲烷發酵主要(yào)利用(yòng)廢水(shuǐ₹≥)、廢渣作(zuò)原料，而在我國(guó)農(nóng)村(cūn)，已推廣÷ β利用(yòng)人(rén)畜糞便及禾草(cǎo)為(wèi)原料發酵生δ₩• (shēng)産甲烷作(zuò)為(wèi)燃料×¥。另外(wài)，大(dà)量的(de)農(nóng)♦'× 副産品或制(zhì)品，如(rú)鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花(huā)生(shē‌> ng)餅、蛋白(bái)胨等都(dōu)是(shì)常用(yòng)的(de)發酵§→"↕工(gōng)業(yè)原料。
　　6、滅菌處理(lǐ)
　　要(yào)獲得(de)微(wēi)生(shēng)物(wù)純培養，必須避‌σ↔免雜(zá)菌污染，因此對(duì)所用(yòng)器(qì)材及工(gōng)作(z¶¶γuò)場(chǎng)所進行(xíng)消毒與滅菌。對(duì)培養基而言，更是(shì)要(yào)進行(xíng)嚴格的(de)滅  ÷↔菌。對(duì)培養基一(yī)般采取高(gāo)壓蒸汽滅菌，一(yī)般培養基用(yòng)1‌↓λ¶.05kg/cm2，121.3℃條件(jiàn)下Ωφ→(xià)維持15～30min可(kě)達到(dào)滅菌目的(de)。在高(gāo)∞•壓蒸汽滅菌過程中，長(cháng)時(shí)間(jiān)高(gāo)溫會(h★♣"$uì)使某些(xiē)不(bù)耐熱(rè)物(wù)質'σ遭到(dào)破壞，如(rú)使糖類物(wù)質形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養基常在0.56βδεkg/ cm2，112.6℃15～30min進行(xíng)滅菌，某些(xiē)¶₩γ<對(duì)糖類要(yào)求較高(gāo)↑™的(de)培養基，可(kě)先将糖進行(xíng)過濾除菌或間(jiān)歇滅♠≤菌，再與其他(tā)已滅菌的(de)成分(fēn)混合；長(cháng)→‌™時(shí)間(jiān)高(gāo)溫還(hái)會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與€ 某些(xiē)陽離(lí)子(zǐ)(特别是(shì)鈣、鎂、鐵↔φ (tiě)離(lí)子(zǐ))結合形成難溶性複合物(wù)而産生(shēng)沉澱，因β×ε'此，在配制(zhì)用(yòng)于觀察和(hé→γσ)定量測定微(wēi)生(shēng)物(wù)γ‍φ生(shēng)長(cháng)狀況的(de)合成培養基時(sh¥∑í)，常需在培養基中加入少(shǎo)量螯合劑，避免培養基中産生(sh‍§←ēng)沉澱，常用(yòng)的(de)£βε螯合劑為(wèi)乙二胺四乙酸(EDTA) ✔。還(hái)可(kě)以将含鈣、鎂、鐵(tiě)等₽ £Ω離(lí)子(zǐ)的(de)成分(fēn)與磷酸鹽、碳酸鹽分ε✔≠♥(fēn)别進行(xíng)滅菌，然後再混合，避免"₩♦形成沉澱；高(gāo)壓蒸汽滅菌後，培養基pH會(‍αhuì)發生(shēng)改變(一(yī)般使pH降低(dī)∑Ωε)，可(kě)根據所培養微(wēi)生(shēng)物(wù)的(☆Ω↕γde)要(yào)求，在培養基滅菌前後加以調整。
　　在配制(zhì)培養基過程中，泡沫的(de)存在對(duì)滅菌處理(lǐ)極∞₽ 不(bù)利，因為(wèi)泡沫中的(de)空(kōng)氣形成隔熱(rè)層，使泡沫中 ↑↔微(wēi)生(shēng)物(wù)難以被殺死。因而有(yǒ→φ $u)時(shí)需要(yào)在培養基中加入消泡沫劑以減少✔δ★¶(shǎo)泡沫的(de)産生(shēng)，或适當提高(gāo)滅菌溫度。^[1]

指一(yī)類利用(yòng)動、植物(wù)或微(wēi)生(shēng☆ γ&)物(wù)體(tǐ)包括其提取物(wù)制(zhì)成的(de)≈♥ε£培養基。如(rú)牛肉膏蛋白(bái)胨培養基、麥芽汁培養基等。

指一(yī)類主要(yào)以化(huà★σ©)學試劑配制(zhì)，同時(shí)還(hái♣®↔§)加有(yǒu)某種或某些(xiē)天然成分Ω£γ(fēn)的(de)培養基。例如(rú)，馬鈴薯蔗糖培養基。

一(yī)類配制(zhì)成的(de)固→∞♠↕體(tǐ)狀态的(de)基質。根據性質又(yòu)分($'fēn)為(wèi)固化(huà)培養基、非可(kě∞∏→)逆性固化(huà)培養基、天然固态培養基、濾膜。

指在液體(tǐ)培養基中加入少(shǎo)量的(de)凝固劑而配制(zhì)成的φ ↓×(de)半固體(tǐ)狀态的(de)培養基。

又(yòu)稱預制(zhì)幹燥培養基，指含有(yǒu)除水(shuǐ)分(fēn)外(wài)的(₹↕de)一(yī)切成分(fēn)的(de)商品培養&≈® 基。

選擇性培養基：一(yī)類根據某微(wēi)生(shēng)物(wù)的(de)特殊營養要(y↑×λào)求或其對(duì)某化(huà)學、物(wσ★©ù)理(lǐ)因素的(de)抗性而設計(jìδ♣)的(de)培養基，具有(yǒu)使混合菌樣☆‌♣♠中的(de)劣勢菌變成優勢菌的(de)功能(néng)，廣泛用(yòng)于菌種篩選等領域。

鑒别培養基：一(yī)類在成分(fēn)中加有(yǒu)能(néng)與目的(de)菌的(de ×δ)無色代謝(xiè)産物(wù)發生(shēng)顯色反應的(de)指示劑，從(cóng)而達到(dào)隻須用(yòng)肉眼辨♦÷‌¶别顔色就(jiù)能(néng)方便的(de)從(cóng)近(jìn)似菌落中找出目的(de)菌菌落的(de)培養基。例如(rú)，伊紅(hóng)美(měi)藍(lán)乳糖培養基（EMB）。