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PPA—ELISA檢測試劑盒在豬瘟抗體(tǐ)臨床監測中的(de)✘ ≠§應用(yòng)

[ 更新時(shí)間(jiān):2013-09-13 ‍₽]

 

PPA—ELISA檢測試劑盒在豬瘟抗體(tǐ)臨床監♦≤ 測中的(de)應用(yòng)
近(jìn)年(nián)來(lái),我國(guó)豬瘟的(de)流行(xíng)α↑和(hé)發病特點發生(shēng)了(le)很≠←(hěn)大(dà)變化(huà),轉變為(wèi)隐性感染和(hé)亞臨床感染,臨≈σ± 床表現(xiàn)也(yě)更加複雜(zá)'>↔↔,既有(yǒu)區(qū)域性流行(xíng),又(yòu)有(yǒu)零星散發,既有(yǒ∞₹→u)高(gāo)死亡率的(de)急性症狀,又(yòu)有(yǒu)持續感染的(de)溫和(hé)性$ δ症狀,出現(xiàn)了(le)所謂&ld♥§quo;非典型豬瘟”、“溫和(hé)型豬瘟&♦​rsquo;’和(hé)&l↔→∞dquo;帶毒母豬綜合征”,病理(l←®★¥ǐ)剖檢也(yě)常常不(bù)同于典型豬瘟的(de)病理(lǐ)變♣φ化(huà),給獸醫(yī)臨床診斷帶來(lái)很(hěn)大(dà)困¥↕€難。盡管血清學抗體(tǐ)檢測方法很(h↔¶ěn)難有(yǒu)效區(qū)分(fēn)疫苗毒與野毒産生(s♠¥φ‍hēng)的(de)抗體(tǐ),但(dàn)由于其具有(yǒu)使用(yòng)φσ&$方便、一(yī)次檢測量大(dà)和(hé)血清容易保存等優點而被廣泛應用(yòng),在豬瘟流行φ₽(xíng)狀态監測和(hé)流行(xíng)病學調查等方面有(yǒu)著✔≥(zhe)重要(yào)作(zuò)用(yòng),也(yě)是(shì)免疫豬群抗體(tǐ)水±©‌₩(shuǐ)平監測的(de)主要(yào)方法,對(duì)疫苗免疫效果評價及免疫程≤↔序的(de)制(zhì)定均具有(yǒu)重要(yào↕≈ ∑)意。本研究應用(yòng)豬瘟病毒PPA&mdasδσ•h;ELISA抗體(tǐ)檢測試劑盒對(duì)436份免疫豬血清≠♠≥樣品進行(xíng)檢測,旨在了(le)解豬瘟的(de)疫苗免疫效果,合理≈​(lǐ)指導豬瘟的(de)防疫,為(wèi)豬瘟的(de)綜合防控提供參考。
1 材料和(hé)方法
1.1 試驗材料
2012年(nián)3一(yī)l2月(yuè)山(shān)東(dōng)濱>×≥∏州預防獸醫(yī)學與動物(wù)生(shēng)物(wù)∏§技(jì)術(shù)重點開(kāi)放(fàng)實驗室采集山(shān)>‍ 東(dōng)、河(hé)南(nán)、河(hé"¥)北(běi)等地(dì)免疫豬臨床血樣共436份,按常規方法分(f♠¶ēn)離(lí)血清并編号,-20℃保存備用(yòng)。豬瘟病毒PPA—→↑ ♠ELISA抗體(tǐ)檢測試劑盒121由本實驗室制(z∞$≤hì)備并保存。ELX800一(yī)酶₩$‌标儀、37℃恒溫培養箱、8道(dào)移液器(qì)。
1.2 間(jiān)接EUSA檢測步驟及結果判定
1)在A1和(hé)A2孔中分(fēn)别加入試劑盒中的(de)100 uL陰性對(duì)©' "照(zhào)血清;
2)在A3和(hé)A4孔中分(fēn)别加入試劑盒中的α↓←↕(de)100 L陽性對(duì)照(zhào)血清;
3)将分(fēn)離(lí)的(de)臨床血清1:100稀釋後,取100 L加入相(xiàng)應® €∑孔中,并做(zuò)好(hǎo)記錄;
4)37℃孵育1 h;
5)将各孔的(de)廢液棄入廢液桶,将試劑盒內(nèi)20x濃縮洗滌液用(yòng)蒸餾水♣δδ₩(shuǐ)稀釋成1 X洗滌液後每孔加入約300 L進行(xíng)洗闆¥✔,重複5次,每次2~3 min;
6)将試劑盒內(nèi)lOx酶标抗體(tǐ)用(yòng)蒸餾水(¥≥shuǐ)稀釋成l×酶标抗體(tǐ)後,每孔加入←✔₽α100 L;
7)37℃孵育1 h;
8)重複步驟5);
9)每孔加入試劑盒中的(de)底物(wù)溶液100 L;
10)室溫避光(guāng)孵育5 min;
l1)每孔加入試劑盒中的(de)終止液50 L;
12)在酶标儀的(de)450 nm波長(cháng)處測定δ÷<‌各孔的(de)吸光(guāng)度值,即0D €₩♠值。當陰性對(duì)照(zhào)血清的(de)0D45o值☆✔π≤0.2、陽性對(duì)照(zhào)血清的∑↔(de)0D45o值I>0.4時(shí),試驗結果成立,記錄各檢測樣品的(de)O→‌D45o值,計(jì)算(suàn)各檢測樣品的(de)S/P₽‍值。當樣品S/P值≥0.282時(shí)判為(wèi)陽性,>λ當S/P值<0.231時(shí)判為(wèi)陰性,當0.231≤S/P值<0♠≤λ.282時(shí)判為(wèi)可(kě)疑。對(duì)可(kě)疑樣品須重新檢測,重檢$δΩ£時(shí),S/P值I>0.231為(wèi)陽性。
2 結果
本試驗陰性對(duì)照(zhào)血清的(d₩εe)0D45o值分(fēn)别為(wèi¥✔©)0.105和(hé)0.107(取均值0.1ש06),陽性對(duì)照(zhào)血清的(de)OD45o值分(fēn)别為(wèi)1φ© ¥.115和(hé)1.121(取均值1.118)'♥¥,符合陰性對(duì)照(zhào)血清∞​★0D45o值≤0.2、陽性對(du✘∑¥&ì)照(zhào)血清0D45o值>10.4的(de)α®≥×要(yào)求,試驗結果成立。根據S/P值計(φ‌€jì)算(suàn)公式,計(jì)算(suàn)得(de)到(dào)陽性樣品376±☆ε§份、陰性樣品35份、可(kě)疑樣品25份。對(duì)25份↓<'可(kě)疑樣品重新檢測,得(de)到(d↓♣'♥ào)陽性樣品18份、陰性樣品7份。436份€✔δ檢測樣品共計(jì)得(de)到(dào)陽性樣品394份、陰性樣品42份,陽性率為(wèi♥₹®)90.4%(394/436)。
3 討(tǎo)論

      豬瘟的(de)診斷方>↕法很(hěn)多(duō),主要(yào)包括病毒的(de)分(fēn)離σ♥ →(lí)與鑒定、血清學方法及分(fēn)子(zǐ)生(shēng)物(α♦‌πwù)學檢測方法。其中,血清學方法是(shì)檢測豬瘟血清抗體(tǐ)的(de)重要(yào)手∏£§段之一(yī)。ELISA診斷方法具有(yǒu)敏感性♥×<和(hé)特異性強、操作(zuò)簡單、檢測快(kuài)速、重複性好(hǎo)、高(gāo)通(♣₹>∑tōng)量、無輻射、價格低(dī)廉等特點,在病毒學、免疫學、血清學、寄生(shēng)蟲$♠&學、細菌學等領域得(de)到(dào)了(l ​e)廣泛應用(yòng),是(shì)當前動物(wù)傳染病檢疫、流行(xíng)病學調查和(héβσ✘")免疫監測廣泛采用(yòng)的(de)血清學診斷技(jì)術(shù)[21。因此,筆(b¶×ǐ)者選擇PPA—ELISA抗體(tǐ)檢測試劑盒對(duì)豬瘟€™免疫後的(de)抗體(tǐ)水(shuǐ)平進行(xíng)監測,' ∑結果發現(xiàn),豬瘟的(de)平均抗體(tǐ)陽性率高(gāo)達90.4%,<✔∏♠遠(yuǎn)遠(yuǎn)高(gāo)于我國↔£(guó)農(nóng)業(yè)部要(yào)求的(de)豬瘟平均抗體(tǐ)陽性率7₹¥®§5%的(de)标準,說(shuō)明(míng)我國(guó)現§∑♥'(xiàn)行(xíng)豬瘟疫苗免疫效果較好(hǎo),但(dàn)仍存在個(g♠₹¥∞è)别豬場(chǎng)免疫失敗的(de)現(xiàn‌☆Ω≈)象。本試驗中抗體(tǐ)水(shuǐ)平不(bù)達标的(de)豬場♣♦§(chǎng)收到(dào)檢測結果後,對(duì)免疫失敗豬及時(shí)重新免疫。本試驗β Ω¥結果顯示,豬瘟病毒PPA—ELISA抗體(tǐ)檢測試劑盒操作✔ (zuò)簡單、敏感、特異、檢測快(kuài)速、高(gāo)通(tōng)量,非常适用(yòngΩ♠)于豬場(chǎng)免疫後的(de)抗體(tǐ)水(shuǐ)平監測。


 

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