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酶聯免疫法原理(lǐ)

[ 更新時(shí)間(jiān):2014-05-10 ]

簡介

  酶聯免疫吸附劑測定法 ,簡稱 酶聯免疫法 ,或者 ELISA法 。
  它的(de)中心就(jiù)是(shì)讓抗體(tǐ)與 酶複合物(wù) 結合,然後通(t•π≠ōng)過顯色來(lái)檢測。
 

步驟

 ELISA用(yòng)血清來(lái)檢測,首先血液要(yào‌¥‍)經過至少(shǎo)半個(gè)小(xiǎo)時(shí)的(de)✔→凝集,然後取 血清 。将酶複合物(wù)用(yòng)稀釋液ε™₹稀釋後,加血清及陰性、陽性對(duì)照(zhào)​§φ←,還(hái)有(yǒu)就(jiù)是(shì)質控品γ→∏←(這(zhè)是(shì)嚴格的(de)要(yào)求,它的(de)範圍必須 ♣在質控範圍內(nèi))。經過一(yī)個(gè)小(xiǎo)時(shí)的(dπ™e)孵育,然後洗闆,加 底物(wù) ,半個(gè)小(xiǎo)時(shí)避光φ×™‍(guāng)反應後加終止液即完成反應部分(fēn),然後就(jiù)✔ ♥ 是(shì)讀(dú)數(shù)。由數(shù)值來(lái)判斷結果‍₹∞的(de)陰性或陽性。
 

基本原理(lǐ)

 ①使抗原或抗體(tǐ)結合到(dào)某種固相(xiàng)載體(tǐ)表面,并保持其 免✘↔δ疫活性 。
  ②使抗原或抗體(tǐ)與某種酶連接成酶标抗原或抗體(tǐ),這(zhè)種酶标抗原或抗體↓↔↑₽(tǐ)既保留其免疫活性,又(yòu)保留酶的(de)活性。在測定時(shí),把受檢标本(測定其↕±♣σ中的(de)抗體(tǐ)或抗原)和(hé©₩<)酶标抗原或抗體(tǐ)按不(bù)同的(de)步驟與固相(xiàng₹"")載體(tǐ)表面的(de)抗原或抗體(tǐ)起反應。用(yòng)洗滌的(de)方法₽₹§$使固相(xiàng)載體(tǐ)上(shàng)形成的★•(de)抗原抗體(tǐ)複合物(wù)與其他(tā)物(wù)質分(fēn)開(₩≈ kāi),最後結合在固相(xiàng)載體(tǐ)上∞ ∞(shàng)的(de)酶量與标本中受檢物(wù)質的(de)量成一(yī)定的(de)比例±β‌€。加入酶反應的(de)底物(wù)後,底物(wù)被酶催化(h≤£&uà)變為(wèi)有(yǒu)色産物(wù),産物(wù)的σ π(de)量與标本中受檢物(wù)質的(de)量直接相(‍↔xiàng)關,故可(kě)根據顔色反應的(de)深淺來(lái)進行(xíng)定≥λ™性或定量分(fēn)析。由于酶的(de)催化(huà)頻(pín)率很(h←•ěn)高(gāo),故可(kě)極大(dà)地(dì)放(fàng)大(dà)反應效果,©¶≈•從(cóng)而使測定方法達到(dào)很(hěn)高(gāo)的(de)敏感度。
  ELISA可(kě)用(yòng)于測定抗原,也(yě)可©π★γ(kě)用(yòng)于測定抗體(tǐ)。在這(zhè)種測定方法中有(yǒu¶$σ)3種必要(yào)的(de)試劑:
  ①固相(xiàng)的(de)抗原或抗體(tǐ)
  ②酶标記的(de)抗原或抗體(tǐ)
  ③酶作(zuò)用(yòng)的(de)底物(wù)。根據試劑的(de)來(lái)源和(h‍∑πé)标本的(de)性狀以及檢測的(de)具備條件(jiàn)↓←,可(kě)設計(jì)出各種不(bù)同類型的(de)檢測方法。
 


 

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